Glejak wielopostaciowy, GBM - diagnoza, leczenie, nowości

[Crono5]

przedruk z:
http://www.abstract.asco.org/AbstView_65_35488.html

Background: DCA is a generic, orally available, small molecule metabolic modulator that has an established history in the treatment of mitochondrial diseases and lactic acidosis. DCA inhibits pyruvate dehydrogenase kinase (PDK), an inhibitor of pyruvate dehydrogenase, a key enzyme in glucose metabolism. DCA preferentially shifts glucose metabolism in cancer cells from glycolysis to glucose oxidation, reversing the unique aerobic glycolysis found in solid tumors. DCA induced apoptosis in cancer cells as evidenced by the efflux of cytochrome c and apoptosis-inducing factor from the mitochondria. Recent studies suggested apoptosis induction by DCA in glioblastoma, endometrial, prostate, and non-small cell lung cancers. In this study we attempt to establish a link between DCA and apoptosis in breast cancer cell lines.

Methods: Six breast cancer cell lines were investigated (BT474, MCF-7, MDA-MB231, MDA- MB468, SKBR3, T47D). Quantitative real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) was performed using Taqman probes to identify increased DNA templates of PDK isoforms 1-4, using DCA concentrations from 0 to 20mM. Western blots were performed to identify increased expression of PDK isoforms and correlate findings with Taqman. MTS (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)- 2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium) assays were performed to measure decreased mitochondrial activity and cytotoxicity. Flow cytometry using annexin V and propidium iodide was performed to measure apoptosis and cell death.

Results: RT-PCR showed increased DNA expression of all PDK isoforms in MDA-MB231 cells after DCA treatment. The effect was most pronounced at 10mM concentration. 10mM of DCA also increased DNA expression of all PDK isoforms in MCF-7 cells, and PDK1 in T47D cells. MTS assays showed increased cell kill and decreased mitochondrial activity in all six cell lines, with IC50 ranging between 20mM and 30 mM. Flow cytometry showed increased apoptosis induced by DCA at IC50 for BT474 and MCF-7 cell lines.

Conclusions: Apoptosis appears to play a role in the mechanism of DCA in breast cancer, with increased PDK isoform expressions, cytotoxicity and decreased mitochondrial activity. Data from flow cytometry suggested DCA-induced apoptosis in two cell lines.

[Crono5]

Badanie mechanizmu dichlorooctanu (DCA) w indukcji apoptozy w nowotworze piersi

tłumaczenie z:
http://www.abstract.asco.org/AbstView_65_35488.html

Tło: DCA jest generyczną molekułą, podawaną doustnie, modulatorem metabolicznym, który był używany przez długi okres czasu w leczeniu schorzeń mitochondrialnych oraz kwasicy mleczanowej. DCA inhibituje kinazę dehydrogenazy pyruvate (PDK) która jest inhibitorem dehydrogenazy pyruvate, kluczowego enzymu w metabolizmie glukozy. DCA korzystnie przełącza metabolizm w komórkach nowotworowych, z glikolizy beztlenowej na tlenową, odwracając unikalny występujący w guzach litych proces oddechowy. Jest potwierdzone , że apoptoza indukowana w komórkach nowotworowych za pomocą DCA, ma miejsce poprzez upływ z mitochondriów cytochromu c oraz czynnika indukującego apoptozę. Niedawne badania sugerowały indukcje apoptozy przez DCA w nowotworach glioblastoma, śluzówki macicy, prostaty, i niedrobnokomórkowym nowotworze płuc. W tym badaniu chcemy ustalić związek pomiędzy DCA a indukcją apoptozy w liniach komórek nowotworu piersi.

Metody: Sześć linii komórkowych nowotworu piesi zostało zbadanych (BT474, MCF-7, MDA-MB231, MDA- MB468, SKBR3, T47D). Została przeprowadzona reakcja łańcuchowa polimerazy DNA z analizą ilości produktu w czasie rzeczywistym (RT-PCR) z użyciem sond TaqMan by móc zidentyfikować matryce DNA izoform PDK 1-4 które uległy wzrostowi, z użyciem skupisk DCA w granicach od 0 do 20mM. By zidentyfikować zwiększoną ekspresje izoform PDK , został przeprowadzony Western blot a następnie wyniki zostały skorelowane za pomocą Taqman'a. Zostały przeprowadzone analizy MTS (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)- 2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium) by móc zmierzyć obniżoną aktywność mitochondrialną oraz cytotoksyczność. By zmierzyć śmierć komórek oraz apoptozę została przeprowadzona Cytometria przepływowa z użyciem annexin V i propidium iodide.

Wyniki : W wyniku terapii DCA reakcja RT-PCR wykazała podwyższoną ekspresje wszystkich izoform PDK w komórkach MDA-MB231. Najbardziej wyrazisty efekty występował przy koncentracji 10nM. 10mM DCA również podwyższał ekspresje DNA wszystkich izoform PDK w komórkach MCF-7, oraz PDK1 w komórkach T47D. Analizy MTS wykazały zwiększone uśmiercanie komórek i obniżoną aktywność mitochondrialną we wszystkich sześciu liniach komórkowych, z poziomem IC50 zawierającycm się w zakresie od 20mM do 30mM. Cytometria
przepływowa wykazała indukcje apoptozy przy IC50 dla linii komórkowych BT474 oraz MCF-7.

Wnioski: Apoptoza wydaje sie odgrywać role w mechanizmie DCA w nowotworze piersi, z podwyższoną ekspresją izofom, cytotoksycznością oraz zmniejszoną aktywnością mitochondrialną. Dane z cytometrii przepływowej sugerowały indukowaną przez DCA apoptozę w dwóch liniach komórkowych.